Измерение OD600: контроль роста микроорганизмов в планшете
Измерение OD600: контроль роста микроорганизмов в планшете
OD600 (оптическая плотность при 600 нм) — стандартный показатель плотности бактериальной или дрожжевой культуры в микробиологии и биотехнологии. По нему отслеживают фазу роста, определяют момент индукции экспрессии белка и нормируют количество клеток для последующих экспериментов. Измерять OD600 удобно прямо в микропланшете на ридере абсорбции — это быстро и не требует переноса проб в кюветы. Подобрать подходящий прибор поможет наш каталог планшетных ридеров и руководство по выбору планшетного ридера.
Почему именно 600 нм
На 600 нм клетки не поглощают свет в классическом смысле, а рассеивают его — поэтому корректнее говорить не о поглощении, а о светорассеянии (турбидиметрии). Длину волны 600 нм выбрали потому, что на ней минимально мешают пигменты среды и компоненты клеток, а сигнал хорошо коррелирует с концентрацией клеток в рабочем диапазоне. Именно поэтому показатель универсален и сопоставим между лабораториями.
Особенность планшета: поправка на длину пути
Главное отличие измерения в планшете от кюветы — длина оптического пути. В стандартной кювете путь равен 10 мм, а в лунке планшета он зависит от объёма жидкости и обычно составляет 3–5 мм. Поэтому значения OD600 в планшете будут ниже, чем в спектрофотометре с кюветой. Решения два:
- Использовать функцию автоматической поправки на длину пути (path length correction), которая приводит значения к эквиваленту 10 мм — она есть в ПО современных ридеров (SkanIt, Gen5, MARS).
- Построить собственный калибровочный коэффициент между показаниями планшета и кюветного спектрофотометра для конкретного объёма лунки.
Кривая роста и фазы культуры
Кинетическое измерение OD600 с интервалом 10–30 минут при термостатировании и встряхивании даёт классическую кривую роста с характерными фазами:
| Фаза | Что происходит | OD600 (E. coli, ориентир) |
|---|---|---|
| Лаг-фаза | Адаптация, деления почти нет | 0,02–0,1 |
| Экспоненциальная (лог) | Активное деление, экспресс-рост | 0,1–1,0 |
| Стационарная | Рост = гибель, плато | 1,0–2,0+ |
| Фаза отмирания | Гибель преобладает | снижается |
Практические рекомендации
Чтобы результаты были воспроизводимыми:
- Всегда вычитайте сигнал чистой среды (бланк) в отдельной лунке.
- При OD600 выше 0,8–1,0 в кювете (или соответствующего предела в планшете) разводите пробу — выше линейность нарушается.
- Используйте встряхивание перед каждым считыванием, чтобы клетки не оседали.
- Поддерживайте температуру культивирования (например, 37 °C) термостатом ридера для корректной кинетики.
- Для сравнения с историческими данными включайте поправку на длину оптического пути.
Частые вопросы
Почему OD600 в планшете ниже, чем в кювете?
Можно ли мерить OD600 фильтровым ридером?
Какой формат планшета выбрать для кривых роста?
Приборы для микробиологии от KombiMED
KombiMED GmbH поставляет планшетные спектрофотометры с термостатом и шейкером, подходящие для измерения OD600 и построения кривых роста. Подберём конфигурацию под вашу лабораторию, обеспечим поставку из Европы, монтаж и обучение. Свяжитесь с нашей командой для консультации.